NAT-8L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-415533-ACT

O NAT8L humano codifica a NAT-8L, uma N-acetiltransferase que catalisa a formação de N-acetilaspartato (NAA) a partir de aspartato e acetil-CoA, conectando a disponibilidade mitocondrial de acetil-CoA ao metabolismo de aminoácidos e do acetato. O NAA participa do processamento do carbono celular e da homeostase de grupos acetil, com implicações a jusante para a síntese de lipídios e processos relacionados à mielina no sistema nervoso. Assim, a atividade da NAT8L é relevante para a remodelação metabólica e o acoplamento neurônio–glia, e alterações nas vias associadas ao NAA têm sido associadas a fenótipos neurológicos e disfunção do neurodesenvolvimento. Como um nó metabólico mensurável, o NAT8L é frequentemente investigado em estudos de função mitocondrial, equilíbrio de acetilação e metabolismo energético cerebral.

NAT-8L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NAT8L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NAT-8L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NAT8L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NAT8L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NAT-8L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NAT8L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NAT-8L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NAT-8L em células tumorais com expressão de NAT8L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.