Na⁺ CP type VαCRISPR激活质粒(h): sc-402162-ACT

SCN5A 编码电压门控钠通道 Na⁺ CP Vα 型（NaV1.5）的成孔 α 亚基，是兴奋性细胞快速去极化与动作电位起始的关键决定因素。NaV1.5 通过介导向内的 Na⁺ 电流，调控膜兴奋性、传导速度，并将电活动与下游 Ca²⁺ 处理及兴奋–收缩过程相耦联。SCN5A 的功能与离子稳态网络及信号通路相整合，这些通路影响通道转运、依赖磷酸化的门控，以及应激反应性的电重构。SCN5A 的遗传与调控层面的扰动与遗传性和获得性心律失常易感性相关，使其成为研究钠电流动力学与电生理相关表型机制的重要核心靶点。

Na+ CP type Vα CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SCN5A的表达。

Na+ CP type Vα CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SCN5A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SCN5A转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Na+ CP type Vα表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SCN5A位点，并能够研究内源性位点上依赖于Na+ CP type Vα的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SCN5A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Na+ CP type Vα通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。