Nanos3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407364

Descripción general

NANOS3 codifica la proteína de unión a ARN Nanos3, un regulador postranscripcional conservado que es necesario para la supervivencia y el mantenimiento de las células germinales primordiales humanas. Nanos3 actúa en programas de especificación de la línea germinal al reprimir la traducción y favorecer la degradación selectiva de ARNm, integrándose con vías que controlan las decisiones de destino celular, la proliferación y la apoptosis durante el desarrollo temprano. La actividad desregulada de NANOS3 se ha asociado con un desarrollo defectuoso de las células germinales y fenotipos relacionados con la infertilidad, y se ha informado de una expresión alterada en determinados tumores derivados de células germinales. Como determinante de la línea germinal, NANOS3 es un nodo útil para analizar redes de regulación del ARN y programas transcripcionales restringidos a linajes específicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nanos3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NANOS3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NANOS3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NANOS3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nanos3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NANOS3 para la investigación de la señalización de Nanos3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NANOS3 críticos para la función de Nanos3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NANOS3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nanos3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nanos3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NANOS3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nanos3 (h) y el plásmido HDR Nanos3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NANOS3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NANOS3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.