Nanos2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404123

概要

NANOS2は、進化的に保存されたRNA結合タンパク質であるNanos2をコードしており、生殖細胞の運命を転写後段階で制御する調節因子として機能します。ヒトでは、NANOS2はmRNAの安定性や翻訳の制御を通じて、精原細胞の分化プログラムを促進すると同時に、異常な減数分裂への進入を抑制することで、雄性生殖系列の同一性維持に関与しています。その機能は、生殖系列の制御ネットワークや、配偶子形成期におけるトランスクリプトーム再編を形作るRNA顆粒関連プロセスとも交差します。NANOSファミリータンパク質が関与する生殖細胞発生経路の破綻は、不妊症、性腺発生異常、生殖細胞腫瘍の生物学に関する研究において重要です。

Nanos2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるNANOS2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、NANOS2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、NANOS2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Nanos2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Nanos2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、NANOS2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Nanos2の機能に不可欠なNANOS2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、NANOS2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Nanos2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびNanos2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、NANOS2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Nanos2 HDRプラスミド（h）および Nanos2 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNANOS2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNANOS2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。