NAGAT Double Nickaseプラスミド (h): sc-401118-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- NAGAT Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- NAGATダブルニカースプラスミド（h）およびNAGATダブルニカースプラスミド（h2）は、ABOを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
NAGAT Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NAGAT Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABO は、ゴルジ体に局在する糖転移酵素である N-アセチルガラクトサミニルトランスフェラーゼ（NAGAT）をコードしている。NAGAT は H 抗原に N-アセチルガラクトサミンを転移し、糖脂質および糖タンパク質上に A 型血液型抗原決定基を生成する。この活性は分泌経路における末端糖鎖修飾の中核を成し、タンパク質輸送、膜の組織化、免疫認識に影響する細胞表面の糖鎖エピトープを形成する。ABO における遺伝的多様性は ABO 血液型表現型の基盤であり、凝固因子の生物学や炎症シグナル伝達の差異とも関連づけられていることから、糖鎖構造が血管系および免疫系の文脈で疾患関連プロセスに結び付くことが示唆される。したがって ABO/NAGAT は、特定の糖転移酵素活性が糖タンパク質機能や細胞間相互作用をどのように調節するかを解析するための、広く用いられるモデルである。
NAGAT ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ABO 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ABO内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ABOの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ABOが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。