NACA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408139-ACT

ヒトのNACAは、新生ポリペプチド結合複合体サブユニットα（NACA1）をコードしており、リボソームに結合するシャペロンとして、伸長中のポリペプチド鎖に結合し、翻訳共役的なフォールディング、標的化、品質管理の協調を助けます。NACA1はパートナーサブユニットとともに、リボソーム出口トンネルにおける新生鎖の相互作用を調節し、小胞体への標的化やストレス適応応答に関連するタンパク質生合成およびプロテオスタシス経路に影響を与えます。産生的な翻訳とミスフォールドタンパク質の処理とのバランスを形作ることにより、NACA1は、増殖プログラムやストレスシグナル伝達など、翻訳制御が変化した細胞状態に関与します。NACA/NACA1発現の異常は複数の疾患関連状況で報告されており、翻訳共役的な制御が細胞運命や転写ネットワークにどのように影響するかを解明する機構研究が促されています。

NACA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NACAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

NACA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NACA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNACA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性NACA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNACA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるNACA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNACA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるNACA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。