N-cadherin Plasmide Double Nickase (m): sc-419593-NIC

Il gene murino Cdh2 codifica la N-caderina, un recettore di adesione calcio-dipendente che media giunzioni omofiliche cellula-cellula e si collega al citoscheletro di actina tramite complessi di catenine. La N-caderina coordina una segnalazione dipendente dal contatto che influenza programmi simili alla transizione epitelio-mesenchimale, la migrazione collettiva, l’estensione dei neuriti e la formazione delle sinapsi, e si interfaccia con vie come Wnt/β-catenina, le Rho GTPasi e Hippo/YAP/TAZ, che regolano la polarità e la meccano-trasduzione. Durante lo sviluppo e il rimodellamento tissutale, Cdh2 è essenziale per la morfogenesi, il patterning cardiaco e neurale e il mantenimento dell’integrità delle giunzioni aderenti. Un’espressione o una localizzazione deregolata della N-caderina è spesso utilizzata come marcatore di stati di adesione alterati in modelli di fibrosi, disturbi del neurosviluppo e invasione delle cellule tumorali, supportando studi meccanicistici di fenotipi dipendenti dall’adesione.

N-cadherin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Cdh2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Cdh2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Cdh2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Cdh2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.