Plasmide CRISPR/Cas9 KO MZT2B (h): sc-406507

Présentation

MZT2B (protéine 2B organisatrice du fuseau mitotique) code une petite protéine centrosomale qui participe à l’organisation des microtubules via le complexe en anneau de la γ‑tubuline (γTuRC) et des facteurs associés au centrosome. En soutenant la nucléation des microtubules dépendante de la γ‑tubuline, MZT2B contribue à l’assemblage du fuseau, au fonctionnement du centrosome et à une ségrégation fidèle des chromosomes durant la mitose. La perturbation des réseaux régulateurs du centrosome et du fuseau est une caractéristique fréquente de l’instabilité génomique, reliant les voies impliquant MZT2B à une dérégulation du cycle cellulaire couramment étudiée en biologie du cancer et dans des modèles de stress prolifératif. MZT2B est donc pertinente pour étudier l’homéostasie du centrosome, la progression mitotique et des processus de trafic dépendants des microtubules.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MZT2B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MZT2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MZT2B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MZT2B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MZT2B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MZT2B pour l'étude de la signalisation de MZT2B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MZT2B essentiels à la fonction de MZT2B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MZT2B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MZT2B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MZT2B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MZT2B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MZT2B plasmide HDR (h) et le MZT2B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MZT2B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MZT2B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.