Plásmido CRISPR de Activación (m) MYT1L: sc-421811-ACT

El gen Myt1l de ratón codifica MYT1L, un factor de transcripción del linaje neural con dominios de unión al ADN tipo dedo de zinc C2HC que ayuda a consolidar la identidad neuronal y a regular redes génicas durante la neurogénesis y la maduración. MYT1L funciona principalmente como un represor transcripcional en neuronas en diferenciación, moldeando programas implicados en la especificación de subtipos neuronales, el desarrollo sináptico y el mantenimiento de estados neuronales posmitóticos. La alteración de la dosis o de la función de MYT1L se asocia con fenotipos del neurodesarrollo, incluidos la discapacidad intelectual y rasgos relacionados con el trastorno del espectro autista, lo que lo convierte en un nodo valioso para estudiar mecanismos de regulación génica en el sistema nervioso en desarrollo y adulto. En modelos celulares, el control transcripcional dependiente de MYT1L se entrecruza con la regulación de la cromatina y con vías sensibles a la actividad neuronal que influyen en la formación de circuitos y la plasticidad.

MYT1L El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Myt1l sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MYT1L El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Myt1l en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Myt1l, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MYT1L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Myt1l y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MYT1L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MYT1L en células tumorales con expresión de Myt1l silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.