Myosin XVIIIB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410206-ACT

O MYO18B humano codifica a miosina XVIIIB, uma proteína motora não convencional associada à actina, implicada na organização da arquitetura do citoesqueleto e na coordenação de processos dependentes de actina, como adesão celular, migração e organização intracelular. Por meio de interações com redes de actina e complexos de ancoragem (scaffolding), o MYO18B contribui para a mecanotransdução e para a manutenção da morfologia celular, conectando a dinâmica do citoesqueleto a programas de sinalização mais amplos que regulam a estrutura dos tecidos. Alterações na expressão de MYO18B ou perturbações na regulação do citoesqueleto foram relatadas em estudos de biologia tumoral e de fenótipos relacionados ao músculo, nos quais mudanças na organização actomiosina podem influenciar invasão, contratilidade e diferenciação. Como resultado, o MYO18B é frequentemente investigado em vias que governam a motilidade celular, a remodelação do citoesqueleto e alterações do comportamento celular associadas ao câncer.

Myosin XVIIIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MYO18B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Myosin XVIIIB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MYO18B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MYO18B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Myosin XVIIIB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MYO18B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Myosin XVIIIB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Myosin XVIIIB em células tumorais com expressão de MYO18B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.