Myosin Ia Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-436599

Panoramica

Myo1a codifica la miosina Ia, un motore basato sull’actina arricchito nelle cellule epiteliali polarizzate, dove sostiene la struttura dei microvilli e l’accoppiamento membrana–citoplasma alla superficie apicale. La miosina Ia contribuisce alla dinamica dei filamenti di actina, alla tensione di membrana e ai processi di traffico vescicolare che aiutano a mantenere l’organizzazione dell’orletto a spazzola e la funzione di barriera dell’epitelio. Attraverso interazioni con la rete corticale di actina, influenza vie che regolano la polarità cellulare, l’assorbimento e le risposte meccaniche nell’epitelio intestinale. Alterazioni della funzione o dell’espressione di MYO1A sono state associate a disregolazione epiteliale e sono state investigate nella patobiologia gastrointestinale, anche in contesti di compromissione della barriera e tumorigenesi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Myosin Ia (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Myo1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Myo1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Myo1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Myosin Ia.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Myo1a per lo studio della segnalazione di Myosin Ia, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Myo1a critici per la funzione di Myosin Ia
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Myo1a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Myosin Ia CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Myosin Ia CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Myo1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Myosin Ia Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Myosin Ia (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Myo1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Myo1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.