MYH9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (r): sc-437291-ACT

MYH9 codifica a miosina IIA não muscular, uma proteína motora baseada em actina que impulsiona a contratilidade celular, a citocinese e a remodelação dinâmica do citoesqueleto cortical em células de rato. Por meio da regulação da tensão actomiosínica, MYH9 influencia a renovação de adesões focais, a polaridade celular e vias de mecanotransdução que coordenam a migração e a organização dos tecidos. A função de MYH9 interage com a sinalização RhoA/ROCK e com redes citoesqueléticas ligadas a integrinas, que controlam o tráfego de membrana, processos semelhantes à fagocitose e a manutenção de barreiras epiteliais e endoteliais. A atividade alterada de MYH9 está associada a defeitos na produção de plaquetas e na hemostasia, a fenótipos renais e auditivos e a uma desregulação citoesquelética mais ampla relevante para estudos de inflamação, fibrose e modelos de invasão de células cancerosas.

MYH9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (r) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição , onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH9 em células tumorais com expressão de silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.