MYH9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421784-ACT

Myh9 codifica a cadeia pesada da miosina II A não muscular (MYH9), um motor central baseado em actina que gera força contrátil e sustenta a tensão cortical, a dinâmica de adesão e a citocinese. A atividade de MYH9 integra-se à sinalização RhoA/ROCK, à remodelação de fibras de estresse de actina e à renovação de adesões focais para regular a polaridade celular, a migração e a mecanotransdução. Em tecidos de camundongo, Myh9 contribui para a função de células hematopoéticas e imunes, a integridade epitelial e a morfogênese do desenvolvimento, tornando-se um alvo útil para estudar o controle citoesquelético da arquitetura tecidual. A contratilidade dependente de MYH9 desregulada está associada a defeitos na divisão celular e na função de barreira e é frequentemente investigada em modelos de inflamação, fibrose e invasão associada ao câncer.

MYH9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Myh9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MYH9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Myh9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Myh9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MYH9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Myh9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MYH9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MYH9 em células tumorais com expressão de Myh9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.