MYH4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400467-ACT

MYH4はミオシン重鎖4（myosin heavy chain 4）をコードしており、アクチンと協働してATP依存的なクロスブリッジサイクルを通じて力を発生させる、速筋型骨格筋の収縮モーターです。サルコメアの太いフィラメントの中核構成要素として、MYH4は筋原線維の組み立て、筋線維タイプの規定、ならびにカルシウム制御や代謝シグナル伝達ネットワークによって調節される筋機能プログラムに寄与します。MYH4は速筋骨格筋の生理において最もよく特徴づけられている一方で、ミオシンアイソフォーム発現の変化やサルコメア再構築は神経筋疾患やミオパチーの病態で繰り返し見られる特徴でもあり、筋生物学研究におけるマーカーおよび機序上の要所としての有用性を支持します。MYH4発現を調節することは、ヒト細胞モデルにおいて収縮性、筋適応、ストレス応答を制御する経路を解析するための実行可能な手段となります。

MYH4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYH4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYH4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYH4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYH4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYH4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYH4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYH4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYH4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYH4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。