MYH3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400555-ACT

MYH3 codifica la catena pesante della miosina del muscolo scheletrico embrionale, un componente fondamentale del motore del filamento spesso che converte l’idrolisi dell’ATP in forza contrattile. Svolge un ruolo centrale nella miofibrillogenesi e nell’organizzazione del sarcomero durante le prime fasi della miogenesi, coordinando le interazioni actina–miosina necessarie per la formazione e la maturazione delle fibre muscolari. L’espressione di MYH3 si integra con i programmi trascrizionali dello sviluppo e con le vie di assemblaggio del citoscheletro che determinano l’architettura muscolare e le proprietà contrattili. La variazione genetica o l’espressione disregolata di MYH3 è stata associata a disturbi congeniti dello sviluppo del muscolo scheletrico caratterizzati da contrattilità compromessa e da un’alterata organizzazione muscoloscheletrica, rendendolo un bersaglio rilevante per lo studio delle miopatie dello sviluppo.

MYH3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYH3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYH3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYH3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYH3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYH3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYH3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYH3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYH3 nelle cellule tumorali con espressione di MYH3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.