MyD88 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417166-ACT

MYD88 kodiert MyD88, ein zentrales Adapterprotein der Signalübertragung über Toll-like-Rezeptoren (TLR) und den Interleukin-1-Rezeptor (IL-1R), das die Rezeptoraktivierung mit der nachgeschalteten Aktivierung von NF-κB und MAPK koppelt. Über seine TIR- und Death-Domänen koordiniert MyD88 den Zusammenbau des Myddosom-Komplexes mit IRAK-Kinasen und TRAF6 und fördert so die Expression entzündungsrelevanter Gene sowie die Aktivierung angeborener Immunzellen. Eine fehlregulierte MYD88-Signalübertragung wird mit aberranter Zytokinproduktion, chronischer Entzündung und onkogenen Signalprogrammen in ausgewählten hämatologischen Malignomen in Verbindung gebracht und stellt damit einen zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Immunsignalgebung dar. MYD88 ist zudem an Zellüberlebens- und Stressantwort-Signalwege angebunden und unterstützt Forschung zur kontextabhängigen Wechselwirkung zwischen angeborener Erkennung und transkriptioneller Kontrolle.

MyD88 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYD88-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MyD88 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYD88-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYD88-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MyD88-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYD88-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MyD88-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MyD88-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYD88-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.