Mucin 16/MUC16 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403050-ACT

MUC16 codifica a mucina 16, uma mucina transmembranar de alto peso molecular, fortemente O-glicosilada, que contribui para o glicocálix epitelial e para a função de barreira mucosa. Por meio de suas extensas repetições em tandem extracelulares e de sua cauda citoplasmática, a MUC16 modula interações célula–célula e célula–matriz, impacta programas de adesão e migração e pode influenciar redes de sinalização de receptores e o reconhecimento imune na superfície celular. Alterações na expressão e na glicosilação de MUC16 são amplamente estudadas no contexto de neoplasias epiteliais, nas quais se correlacionam com mudanças na invasão, no potencial metastático e nas interações com o microambiente tumoral. Assim, a MUC16 é frequentemente utilizada como um nó funcional para investigar a biologia de mucinas de superfície, glicoepítopos e sinalização próxima à membrana em modelos celulares humanos.

Mucin 16/MUC16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MUC16 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mucin 16/MUC16 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MUC16 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MUC16, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mucin 16/MUC16. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MUC16 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mucin 16/MUC16 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mucin 16/MUC16 em células tumorais com expressão de MUC16 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.