MTBP Double Nickaseプラスミド (h): sc-404307-NIC

Mdm2結合タンパク質（MTBP）は核内因子であり、Treslin/TICRRやCDC45などの複製関連タンパク質との相互作用を介して、DNA複製開始およびS期進行の制御に関与している。MTBPは複製起点の発火（origin firing）とゲノム安定性を支えるほか、細胞周期チェックポイントやストレス応答シグナルとも連携し、複製ダイナミクスを増殖制御へと結び付ける。MTBP発現の異常は、複数の腫瘍状況で観察される複製ストレス耐性の変化や染色体不安定性と関連しており、DNA複製と腫瘍性増殖プログラムを結び付ける経路を研究する上で有用な標的座位である。MTBPの機能解析は、ヒト細胞における複製タイミング、DNA損傷シグナル伝達、ならびに有糸分裂の正確性を規定する機構の理解に寄与する。

MTBP ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MTBP 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MTBP内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MTBPの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MTBPが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。