Plasmide CRISPR d'Activation (h2) MT-MMP-4: sc-405757-ACT-2

Le gène humain MMP17 code MT‑MMP‑4 (métalloprotéinase matricielle 17), une métalloprotéase membranaire de type MT ancrée au glycosylphosphatidylinositol (GPI), qui assure une protéolyse péricellulaire afin de réguler le remodelage de la matrice extracellulaire et les interactions cellule–matrice. En clivant des composants de la matrice et en modulant la disponibilité de signaux bioactifs, MT‑MMP‑4 influence des voies impliquées dans la morphogenèse tissulaire, la migration cellulaire et la dynamique des microenvironnements inflammatoires. Une activité dérégulée de MMP17 a été associée à des contextes de remodelage pathologique, notamment l’invasion tumorale ainsi que des processus fibreux ou inflammatoires, où un déséquilibre des protéases peut remodeler l’architecture extracellulaire et la signalisation. Des études d’édition génomique et de génomique fonctionnelle ciblant MMP17 appuient l’exploration mécanistique de la régulation des protéases ancrées à la membrane, de leur spécificité de substrat et de phénotypes dépendants de la matrice extracellulaire dans des modèles de cellules humaines et d’organoïdes.

MT-MMP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MMP17 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MT-MMP-4 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MMP17 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MMP17, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MT-MMP-4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MMP17 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MT-MMP-4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MT-MMP-4 dans les cellules tumorales présentant une expression de MMP17 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.