MT-MMP-3 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-421673-ACT

マウスのMmp16は、MT-MMP-3（別名MMP16）をコードしており、細胞膜にアンカーされたマトリックスメタロプロテアーゼとして、細胞周囲でのタンパク質分解（ペリセルラー・プロテオリシス）と細胞外マトリックス（ECM）のリモデリングを担います。マトリックス成分を切断・処理し、さらにpro-MMP2など他のMMPを活性化することで、MT-MMP-3は、プロテアーゼ駆動型のシグナル伝達ネットワークの中で、細胞移動、浸潤、組織形態形成に影響を与えます。その活性は、ECMターンオーバーを介して、上皮間葉転換（EMT）を制御する経路、インテグリン依存的な接着、ならびに増殖因子の生物学的利用能（バイオアベイラビリティ）を調節する経路と交差します。Mmp16の発現異常やプロテアーゼ活性バランスの破綻は、線維化、炎症性微小環境、腫瘍進展モデルなどの病的リモデリングの状況と関連づけられており、これらではマトリックス分解と細胞運動性が中心的な表現型となります。

MT-MMP-3 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mmp16の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MT-MMP-3 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mmp16 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMmp16転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MT-MMP-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMmp16遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMT-MMP-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMmp16発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMT-MMP-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。