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MT-MMP-1CRISPR激活质粒(h) | sc-401028-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
MT-MMP-1CRISPR激活质粒(h2) | sc-401028-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
MMP14 编码膜型 1 基质金属蛋白酶(MT‑MMP‑1),这是一种细胞表面蛋白酶,可通过切割胶原、层粘连蛋白及其他基质成分,并激活 pro‑MMP2,从而驱动细胞周围的细胞外基质(ECM)重塑。通过调控黏着斑周转、整合素信号以及上皮—间质动态过程,MT‑MMP‑1 支持细胞迁移与侵袭等程序,而这些过程是组织形态发生与伤口重塑的核心环节。其活性还与 TGF‑β 及生长因子信号通路发生交叉,协调蛋白水解与细胞骨架重组和基质沉积。MMP14 表达及 MT‑MMP‑1 的蛋白水解功能失调与侵袭性肿瘤生物学、纤维化重塑以及炎症性组织损伤相关,因此它常被用作研究依赖 ECM 的信号传导及微环境对细胞行为调控的关键节点。
MT-MMP-1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MMP14的表达。
MT-MMP-1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MMP14基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MMP14转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MT-MMP-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MMP14位点,并能够研究内源性位点上依赖于MT-MMP-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MMP14表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MT-MMP-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。