MsrB2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-411635-NIC

MSRB2は、メチオニンスルホキシド還元酵素B2（MsrB2）をコードしており、MsrB2はミトコンドリアに局在する酵素です。MsrB2は、メチオニン-R-スルホキシド残基を立体特異的にメチオニンへ還元し、酸化ストレス下でのタンパク質機能の維持に寄与します。酸化されたメチオニンを修復してレドックス恒常性を支えることで、MsrB2はミトコンドリアの品質管理、活性酸素種（ROS）の制御、そして細胞の生存や代謝に影響するプロテオスタシス経路に関与します。MSRB2の活性や発現の変化は、神経変性、代謝異常、がんに伴うストレス適応に関連する酸化損傷の表現型と結び付けて報告されています。そのためMSRB2は、ミトコンドリア機能障害、レドックスシグナル伝達、ストレス応答性遺伝子ネットワークといった文脈で頻繁に研究されています。

MsrB2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MSRB2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MSRB2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MSRB2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MSRB2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。