MSK2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404150-ACT

RPS6KA4 codifica a quinase 2 ativada por mitógenos e estresse (MSK2), uma quinase nuclear de serina/treonina situada a jusante da sinalização de ERK1/2 e p38 MAPK. A MSK2 fosforila reguladores da cromatina e da transcrição, incluindo a histona H3 e fatores da família CREB/ATF, acoplando assim sinais extracelulares à expressão de genes de resposta imediata e ao remodelamento da cromatina dependente de estímulo. Por meio dessas atividades, a MSK2 contribui para o controle de programas transcricionais inflamatórios e de resposta ao estresse, bem como para a regulação da proliferação e diferenciação em múltiplos contextos celulares. A desregulação da sinalização MAPK–MSK tem sido implicada em alterações na expressão de citocinas e em estados transcricionais oncogênicos, tornando o RPS6KA4 um ponto útil para estudar a regulação gênica dirigida por vias de sinalização.

MSK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPS6KA4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MSK2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPS6KA4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPS6KA4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MSK2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPS6KA4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MSK2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MSK2 em células tumorais com expressão de RPS6KA4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.