Msi1CRISPR激活质粒(h): sc-404014-ACT

MSI1 编码 Musashi RNA 结合蛋白 1（Msi1），这是一种保守的转录后调控因子，能够识别并结合靶 mRNA 上的特定序列基序，从而调节翻译效率、mRNA 稳定性以及细胞命运决定。在人类细胞中，Msi1 通过塑造 Notch、Wnt/β-连环蛋白等通路的信号输出，并影响更广泛的 RNA 加工网络（这些网络共同控制增殖与谱系承诺），从而支持干细胞/祖细胞的维持并调控分化程序。多种疾病背景下，MSI1 的异常表达与生长失衡和分化受阻相关，因此它可作为有用的标志物，也是研究类致癌性转录与翻译调控回路的机制切入点。作为 RNA 结合蛋白，Msi1 也与应激反应以及 RNA 颗粒相关的调控研究密切相关，这类调控可在不改变 DNA 序列的情况下重塑基因表达。

Msi1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MSI1的表达。

Msi1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MSI1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MSI1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Msi1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MSI1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Msi1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MSI1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Msi1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。