Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
mSHMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430789
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- mSHMT O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico mSHMT, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:mSHMT Anticorpo (F-11): sc-390641
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
mSHMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-430789 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Shmt2 codifica a serina-hidroximetiltransferase mitocondrial (mSHMT), uma enzima dependente de fosfato de piridoxal que catalisa a interconversão reversível entre serina e glicina, ao mesmo tempo que gera 5,10-metileno-tetraidrofolato no ciclo mitocondrial do carbono único. Essa atividade sustenta a transferência, mediada por folato, de unidades de um carbono necessárias para a biossíntese de nucleotídeos, reações de metilação e a homeostase redox, por meio de ligações com a produção de NADPH e o metabolismo mitocondrial. Ao regular o fluxo de folato na mitocôndria, a SHMT2 influencia programas proliferativos, respostas ao estresse oxidativo e a adaptação metabólica em células de rápida divisão. Alterações na função de SHMT2 têm sido associadas à reprogramação metabólica e a defeitos na manutenção do genoma, relevantes para estudos de biologia tumoral e disfunção mitocondrial.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO mSHMT (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Shmt2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Shmt2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Shmt2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína mSHMT.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Shmt2 para a investigação da sinalização de mSHMT, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Shmt2 críticos para a função mSHMT
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Shmt2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo mSHMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo mSHMT Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Shmt2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo mSHMT Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR mSHMT (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Shmt2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Shmt2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.