MRP-S30 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411530-ACT

MRPS30 codifica a proteína ribossomal mitocondrial S30 (MRP-S30), um componente do ribossomo mitocondrial humano codificado no núcleo, pertencente à subunidade pequena 28S, e necessário para a tradução de mRNAs mitocondriais. Ao sustentar a síntese de subunidades da fosforilação oxidativa (OXPHOS) codificadas pelo DNA mitocondrial, a MRP-S30 contribui para a montagem da cadeia respiratória, a produção de ATP e a proteostase mitocondrial. Alterações em proteínas do ribossomo mitocondrial podem desencadear sinalização de estresse mitocondrial, modificar a bioenergética e causar mudanças na suscetibilidade à apoptose. Mudanças na expressão de MRPS30 têm sido relatadas em múltiplos contextos de doença nos quais o metabolismo mitocondrial é reprogramado, tornando-o um ponto útil para estudar a comunicação mito-nuclear e a regulação metabólica.

MRP-S30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MRPS30 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRP-S30 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MRPS30 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MRPS30, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRP-S30. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MRPS30 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRP-S30 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRP-S30 em células tumorais com expressão de MRPS30 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.