MRG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421714-ACT

O gene Cited2 de camundongo codifica o modulador transcricional MRG1, uma proteína que interage com CBP/p300 e integra sinais de desenvolvimento e de resposta ao estresse com um controle dependente do contexto da expressão gênica. O Cited2 participa de programas transcricionais ligados à adaptação à hipóxia por meio da modulação de vias dependentes de HIF-1 e contribui para decisões de destino celular ao influenciar a disponibilidade de coativadores em elementos regulatórios. Em sistemas de mamíferos, alterações na atividade de CITED2 têm sido associadas a defeitos no padrão embrionário, no desenvolvimento cardiovascular e na regulação hematopoética, refletindo seu papel em orquestrar redes transcricionais específicas de linhagem. Essas propriedades tornam Cited2/MRG1 um alvo relevante para estudar a plasticidade transcricional, respostas ao estresse metabólico e circuitos regulatórios de genes associados à diferenciação.

MRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cited2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MRG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cited2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cited2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MRG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cited2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MRG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MRG1 em células tumorais com expressão de Cited2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.