mPRβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403374-ACT

PAQR8 codifica o receptor de progesterona de membrana beta (mPRβ), um receptor de progestágenos com sete domínios transmembrana da família PAQR que medeia a sinalização rápida e não genômica da progesterona na membrana plasmática. O mPRβ tem sido associado à regulação de vias de segundos mensageiros, como a modulação de cAMP acoplada a Gi/o e a sinalização subsequente por quinases, influenciando o controle do ciclo celular, a diferenciação e programas transcricionais responsivos ao estresse. Em tecidos humanos, a expressão de PAQR8 tem sido estudada em contextos reprodutivos e endócrinos, nos quais a sinalização dependente de progesterona se cruza com redes de hormônios esteroides e com a comunicação cruzada entre receptores de membrana. A desregulação da sinalização da progesterona e alterações na expressão de receptores da família PAQR são frequentemente avaliadas na biologia responsiva a hormônios, incluindo modelos de distúrbios reprodutivos e de remodelamento de vias associado ao câncer, sustentando o PAQR8 como um alvo para estudos mecanísticos da dinâmica da sinalização por esteroides.

mPRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PAQR8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

mPRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PAQR8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PAQR8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de mPRβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PAQR8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de mPRβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via mPRβ em células tumorais com expressão de PAQR8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.