mPRαCRISPR激活质粒(h): sc-402143-ACT

PAQR7 编码膜孕激素受体α（mPRα），属于 PAQR 家族成员，参与发生在细胞膜上的快速、非基因组孕激素信号传导。研究表明，mPRα 与 G 蛋白偶联信号的调控有关，包括 cAMP 动态变化以及影响细胞增殖、分化和生存程序的下游激酶通路。在人体组织中，PAQR7 的表达与内分泌调节及对类固醇激素敏感的细胞状态相关，因此适用于研究激素依赖性的转录网络以及由膜起始的信号串扰。涉及 PAQR7 的孕激素信号通路失调已在生殖生物学与激素相关疾病机制背景下受到关注，这也支持将其作为细胞信号与功能基因组学研究中的研究靶点。

mPRα CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PAQR7的表达。

mPRα CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PAQR7基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PAQR7转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性mPRα表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PAQR7位点，并能够研究内源性位点上依赖于mPRα的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PAQR7表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟mPRα通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。