MMP2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421674-ACT

Il gene murino **Mmp2** codifica la metalloproteinasi di matrice-2 (MMP2), un’endopeptidasi zinco-dipendente che scinde componenti della matrice extracellulare come il collagene di tipo IV e la gelatina, regolando il rimodellamento della membrana basale. L’attività di MMP2 si coordina con la segnalazione mediata dalle integrine, la biodisponibilità dei fattori di crescita e le reti proteasiche che includono i TIMP e l’attivazione del plasminogeno, plasmando programmi di migrazione cellulare, invasione e riparazione tissutale. Grazie ai suoi ruoli nel rimodellamento angiogenico, nel traffico delle cellule infiammatorie e nella riorganizzazione dello stroma, alterazioni dell’espressione o dello stato di attivazione di MMP2 sono ampiamente studiate nella fibrosi, nell’artrite, nella neuroinfiammazione e nella biologia del microambiente tumorale. Nei modelli murini, **Mmp2** rappresenta un punto di accesso maneggevole per analizzare i cambiamenti guidati dalla proteolisi extracellulare in adesione, meccanotrasduzione e funzione di barriera.

MMP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mmp2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MMP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mmp2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mmp2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MMP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mmp2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MMP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MMP2 nelle cellule tumorali con espressione di Mmp2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.