MLTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405472

概要

MAP3K20は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼキナーゼ20（MLTK）をコードしており、ストレスや発生に関するシグナルを統合してMAPKシグナル伝達を調節する上流のセリン/スレオニンキナーゼです。MLTKはJNKおよびp38カスケードの制御に関与することが示されており、細胞ストレスに応答して増殖・分化・アポトーシスを制御する転写プログラムに影響を及ぼします。さらに、キナーゼネットワークとのクロストークを介して、MAP3K20は炎症性シグナル伝達や細胞骨格ダイナミクスを形成し得ます。これらの過程は、がん化（腫瘍化）や、MAPK活性の異常制御を伴うその他の病態でしばしば変化します。そのため、MAP3K20の発現やシグナル伝達の変化は、腫瘍生物学やストレス適応応答といった文脈で、疾患機序研究に関連して検討されてきました。

MLTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMAP3K20遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MAP3K20内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MAP3K20のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MLTKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MLTKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MAP3K20欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MLTKの機能に不可欠なMAP3K20エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MAP3K20ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MLTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMLTK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MAP3K20遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MLTK HDRプラスミド（h）および MLTK HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMAP3K20ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMAP3K20標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。