MLSN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406812

概要

TRPM1は、メラスタチン（melastatin）サブファミリーに属するカチオンチャネルMLSN1をコードしており、膜興奮性や細胞内カルシウムシグナル伝達に寄与するCa2+透過性のTRPチャネルである。網膜のON型双極細胞では、TRPM1は光受容の過程において代謝型グルタミン酸受容体6（mGluR6）の下流で働く主要なエフェクターとして機能し、シナプスからのグルタミン酸作動性入力を脱分極応答へと結び付ける。網膜以外でも、TRPM1に関連するカルシウム流入は、セカンドメッセンジャー経路や転写制御と交差するシグナルプログラムに影響し得る。TRPM1の遺伝学的な破壊または発現異常は視覚シグナル伝達の障害と関連することが報告されており、さらに色素形成に関わる生物学の分野でも研究されていることから、神経生物学およびメラノサイト関連プロセスの双方において重要性が示唆される。

MLSN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRPM1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRPM1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRPM1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MLSN1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MLSN1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRPM1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MLSN1の機能に不可欠なTRPM1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRPM1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MLSN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMLSN1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRPM1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MLSN1 HDRプラスミド（h）および MLSN1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRPM1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRPM1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。