MLL5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403300-ACT

KMT2E codifica a metiltransferase de lisina de histonas MLL5, um regulador associado à cromatina que influencia programas de transcrição que controlam a progressão do ciclo celular, a diferenciação hematopoética e o comprometimento de linhagem. Embora a sua atividade catalítica seja debatida em relação a outros membros da família KMT2, a MLL5 participa da regulação epigenética por meio de interações com a cromatina e com complexos transcricionais, afetando o panorama de modificações de histonas e a estabilidade da expressão gênica. A desregulação de KMT2E/MLL5 tem sido associada a estados alterados de proliferação e diferenciação e é frequentemente estudada no contexto da biologia mieloide, do controle genômico da cromatina em larga escala e da reprogramação transcricional associada ao câncer. Essas propriedades tornam o KMT2E um ponto útil para dissecar vias epigenéticas, circuitos transcricionais e relações entre fenótipo e expressão em células humanas.

MLL5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de KMT2E sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MLL5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus KMT2E em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição KMT2E, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MLL5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus KMT2E nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MLL5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MLL5 em células tumorais com expressão de KMT2E silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.