Plasmide CRISPR/Cas9 KO MK (m): sc-421609

Présentation

Mdk code la midkine (MK), un facteur de croissance sécrété se liant à l’héparine, qui régule la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que la croissance des neurites au cours du développement et du remodelage tissulaire. MK transmet ses signaux via des protéoglycanes de surface cellulaire et des complexes récepteurs afin de moduler des voies liées à MAPK/ERK, PI3K/AKT et aux réseaux de chimiokines inflammatoires, influençant l’angiogenèse et les interactions avec la matrice extracellulaire. Dans des modèles murins, une expression altérée de Mdk est associée à un recrutement dérégulé des cellules immunitaires et à des réponses de réparation aberrantes, ce qui présente un intérêt pour l’étude de l’inflammation, de la fibrose et de la signalisation du stroma associée aux tumeurs. MK contribue également à la mise en place du système nerveux et aux réponses aux lésions, ce qui en fait un nœud pertinent pour explorer les processus neuro-inflammatoires et régénératifs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MK (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mdk dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mdk, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mdk à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MK.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mdk pour l'étude de la signalisation de MK, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Mdk essentiels à la fonction de MK
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mdk pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MK plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mdk. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MK plasmide HDR (m) et le MK (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mdk pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mdk définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.