Mitochondrial Topo I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408700
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Mitochondrial Topo I O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Mitochondrial Topo I, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Mitochondrial Topo I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-408700 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
TOP1MT codifica a topoisomerase I do DNA mitocondrial, uma topoisomerase do tipo IB que resolve o stress torsional gerado durante a replicação e a transcrição do mtDNA, introduzindo quebras transitórias de fita simples e religando-as em seguida. Ao manter a topologia do genoma mitocondrial, a TOP1MT sustenta a expressão génica mitocondrial, a organização dos nucleoides e a capacidade de fosforilação oxidativa. A disrupção da função de TOP1MT tem sido associada a alterações na integridade do mtDNA, desempenho comprometido da cadeia respiratória e maior sensibilidade ao stress mitocondrial. Estes processos são relevantes para estudos de disfunção mitocondrial na neurodegeneração, na doença cardiometabólica e na bioenergética de células cancerígenas.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Mitochondrial Topo I (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TOP1MT em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TOP1MT, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TOP1MT na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Mitochondrial Topo I.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TOP1MT para a investigação da sinalização de Mitochondrial Topo I, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TOP1MT críticos para a função Mitochondrial Topo I
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TOP1MT para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Mitochondrial Topo I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Mitochondrial Topo I Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TOP1MT. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Mitochondrial Topo I Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Mitochondrial Topo I (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TOP1MT para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TOP1MT definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.