Mimitin Double Nickaseプラスミド (h): sc-410509-NIC

NDUFAF2（Mimitin）はミトコンドリアマトリックスに存在するアセンブリー因子で、呼吸鎖複合体I（NADH：ユビキノン酸化還元酵素）の適切な生合成に必須です。複合体Iの成熟と安定性を支えることで、Mimitinは酸化的リン酸化、ミトコンドリア膜電位の維持、ならびに代謝・ストレス応答経路に影響を与える細胞内レドックスバランスの制御に寄与します。複合体Iの組み立てが乱れると、活性酸素種（ROS）の増加やATP産生の低下を招き得るため、NDUFAF2の機能異常はミトコンドリア病態生理やエネルギー需要の高い組織との関連が示唆されます。核ゲノムにコードされたミトコンドリア機能制御因子として、NDUFAF2は代謝リモデリング、ミトコンドリア品質管理、複合体I関連疾患の基盤機構といった文脈でしばしば研究されています。

Mimitin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における NDUFAF2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、NDUFAF2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、NDUFAF2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、NDUFAF2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。