Mig-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401922-ACT

ERRFI1 codifica o gene 6 induzível por mitógenos (Mig-6), uma proteína adaptadora induzível que atua como reguladora de feedback negativo da sinalização da família EGFR/ERBB, restringindo a atividade quinase do recetor e a saída a jusante das vias MAPK/ERK e PI3K/AKT. Ao modular a proliferação, a diferenciação e as respostas ao stress induzidas por fatores de crescimento, o Mig-6 contribui para o controlo homeostático de programas celulares epiteliais e mesenquimatosos. Alterações na expressão ou na função de ERRFI1 têm sido associadas à desregulação da sinalização ERBB observada na biologia do cancro e também têm sido estudadas no contexto da sinalização inflamatória, da remodelação tecidular e de fenótipos do desenvolvimento. Como um nó de via que integra sinais de recetores tirosina-quinase, o Mig-6 é frequentemente investigado em estudos de atenuação de sinal, controlo por feedback e dependência de fatores de crescimento.

Mig-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ERRFI1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mig-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ERRFI1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ERRFI1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mig-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ERRFI1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mig-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mig-6 em células tumorais com expressão de ERRFI1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.