Plasmide Double Nickase (h) MIB1: sc-404769-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MIB1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MIB1 Double Nickase (h) et le plasmide MIB1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MIB1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MIB1 Antibody (D-6): sc-393551
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MIB1 | sc-404769-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MIB1 | sc-404769-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIB1 code pour mindbomb E3 ubiquitin protein ligase 1, une ligase E3 de type RING qui ubiquitinyle des ligands de Notch tels que DLL1 et JAG1 afin de favoriser l’endocytose des ligands et l’activation productive du récepteur Notch. En régulant l’amplitude et la temporalité de la signalisation Notch, MIB1 influence les décisions de destinée cellulaire, la différenciation et l’organisation des tissus, avec des effets en aval sur des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération et l’engagement de lignée. MIB1 interagit également avec l’homéostasie du système ubiquitine–protéasome et avec des voies de trafic endocytique qui modulent la dynamique récepteur–ligand à la surface cellulaire. Des perturbations génétiques et fonctionnelles de MIB1 ont été associées à une altération de la signalisation du développement et à des phénotypes pertinents pour les maladies, notamment dans des contextes où la dérégulation de la voie Notch contribue à l’oncogenèse et à la biologie cardiovasculaire.
MIB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MIB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MIB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MIB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MIB1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.