MIB1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404769-ACT

ヒトMIB1は、mindbomb E3 ubiquitin protein ligase 1をコードしており、JAG1やDLLタンパク質などのNotchリガンドのユビキチン化とエンドサイトーシスを促進するE3ユビキチンリガーゼです。これにより、Notch受容体の有効な活性化が可能になります。リガンドの輸送および受容体—リガンド間シグナル伝達の成立能を調節することで、MIB1は発生過程および恒常性維持の文脈において、細胞運命決定、分化、組織パターニングに影響を与えます。MIB1の活性は、ユビキチン依存的なプロテオスタシスやエンドサイトーシスにおけるソーティング経路と連動し、Notchシグナル下流の転写出力を形成します。MIB1/Notch軸の機能異常は、神経新生の変化、心血管発生における表現型、ならびに腫瘍性シグナル状態と関連づけられており、多様な細胞モデルにおける機構的研究の動機となっています。

MIB1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MIB1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MIB1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MIB1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMIB1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MIB1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMIB1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMIB1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMIB1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMIB1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。