MIA2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418205-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MIA2 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MIA2ダブルニカースプラスミド（h）およびMIA2ダブルニカースプラスミド（h2）は、MIA2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MIA2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-418205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MIA2 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-418205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MIA2（melanoma inhibitory activity family member 2）は、細胞内輸送と特定のカーゴタンパク質の分泌を支える、大型の分泌経路タンパク質をコードしており、小胞体およびゴルジ体に豊富に局在します。MIA2は小胞体（ER）の恒常性維持やタンパク質処理に関与するとされ、その活性はERストレス応答、小胞輸送（小胞体—ゴルジ体を含む）や、細胞外マトリックス関連シグナル伝達の制御といった経路と結び付けられています。MIA2発現の変化は複数の悪性腫瘍や肝疾患で報告されており、腫瘍細胞の分化、浸潤に関連する分泌プロファイル（セクレトーム）の変化、肝組織のリモデリングにおける役割と整合します。これらの特徴から、MIA2は分泌ネットワークの制御や、輸送異常が細胞表現型に及ぼす影響を研究するうえで有用な標的です。
MIA2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MIA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MIA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MIA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MIA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。