Plásmido CRISPR de Activación (h) mGluR-2: sc-403054-ACT

GRM2 codifica el receptor metabotrópico de glutamato 2 humano (mGluR-2), un GPCR acoplado a Gi/o que modula la transmisión sináptica al suprimir la actividad de la adenilato ciclasa, disminuir el AMPc intracelular y regular la conductancia de los canales iónicos. mGluR-2 actúa como autorreceptor y heterorreceptor presináptico para limitar la liberación de glutamato y modelar la excitabilidad neuronal dentro de los circuitos glutamatérgicos. A través de procesos de señalización dependientes de AMPc/PKA, MAPK/ERK y calcio, GRM2 influye en la plasticidad sináptica, el equilibrio de neurotransmisores y las oscilaciones de red. La desregulación de la señalización de GRM2 se ha implicado en la biología de enfermedades neuropsiquiátricas y del neurodesarrollo, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos de disfunción a nivel de circuitos.

mGluR-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GRM2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

mGluR-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GRM2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GRM2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de mGluR-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GRM2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de mGluR-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía mGluR-2 en células tumorales con expresión de GRM2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.