MGA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403878-ACT

O gene humano MGA codifica a proteína associada ao gene MAX (MAX gene-associated protein), um regulador transcricional que interage com MAX e modula a atividade da rede MYC/MAX para moldar programas de expressão gênica específicos de linhagem. MGA participa da repressão transcricional e da regulação da cromatina, incluindo ligações a complexos não canônicos PRC1.6 que restringem a expressão de genes de células germinativas e de desenvolvimento em contextos somáticos. Por meio dessas vias, MGA influencia o controle do ciclo celular, estados de diferenciação e saídas transcricionais metabólicas impulsionadas por sinalização dependente de E-box. A disrupção ou a expressão alterada de MGA tem sido associada à reprogramação transcricional oncogênica em múltiplos tipos de tumor, tornando-o um nó valioso para estudos mecanísticos da regulação gênica relacionada a MYC.

MGA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MGA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MGA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MGA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MGA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MGA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MGA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MGA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MGA em células tumorais com expressão de MGA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.