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MetRS双切口酶质粒(h) | sc-402763-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MetRS双切口酶质粒(h2) | sc-402763-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
人类 **MARS** 基因编码甲硫酰‑tRNA 合成酶(MetRS),这是一种细胞质氨酰‑tRNA 合成酶,负责将甲硫氨酸连接到 tRNA^Met 上,从而启动并维持蛋白质合成。MetRS 位于翻译调控的核心,支持细胞蛋白质稳态(proteostasis),将营养可用性与应激反应同整体 mRNA 翻译联系起来。作为多氨酰‑tRNA 合成酶复合体的一部分,MetRS 参与翻译与信号过程的协同调控,从而影响细胞增殖与分化。MARS 表达或 MetRS 活性失调与癌症以及神经发育和神经退行性疾病背景下观察到的翻译能力改变有关,因此在研究蛋白质组维持机制方面具有重要意义。
MetRS 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 MARS 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对MARS内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏MARS的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了MARS基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。