Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421733

概要

Mt3 はメタロチオネイン3（MT3）をコードしており、MT3 はシステインに富む金属結合タンパク質として、細胞内の亜鉛および銅の利用可能性を調節し、酸化ストレスや求電子性ストレスに対する細胞防御に寄与します。レドックス活性金属を緩衝し、亜鉛依存性シグナル伝達のあり方を形作ることで、MT3 は活性酸素種（ROS）の恒常性、プロテオスタシス、ミトコンドリア機能に関連する経路に影響し得ます。マウス組織では MT3 の発現は神経系で顕著であり、神経分化、シナプス機能、金属関連の神経毒性との関係で研究されてきました。MT3 に関わる金属取り扱いの異常や酸化ストレス機構の破綻は、神経変性や炎症関連の組織障害モデルにおいて重要な要素となります。

Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMt3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mt3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mt3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Metallothionein 3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Metallothionein 3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mt3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Metallothionein 3の機能に不可欠なMt3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mt3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Metallothionein 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびMetallothionein 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mt3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Metallothionein 3 HDRプラスミド（m）および Metallothionein 3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMt3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMt3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。