MEK-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402732-ACT

MAP2K2 codifica a MEK-2, uma quinase MAPK de dupla especificidade que fosforila e ativa ERK1/2 para propagar a sinalização responsiva a mitógenos e fatores de crescimento. Como um nó central na cascata RAS–RAF–MEK–ERK, a MEK-2 regula a progressão do ciclo celular, a diferenciação, a sobrevivência e programas transcricionais adaptativos, integrando sinais de receptores tirosina-quinase e de estresse. A desregulação da atividade de MAP2K2/MEK-2 contribui para uma saída aberrante da via de ERK, implicada em sinalização oncogênica, distúrbios do desenvolvimento e respostas inflamatórias alteradas. Em sistemas modelo humanos, a modulação de MAP2K2 é comumente usada para investigar a dinâmica da via, o controle por feedback e a comunicação cruzada com as vias PI3K/AKT e JNK/p38.

MEK-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAP2K2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MEK-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAP2K2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAP2K2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MEK-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAP2K2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MEK-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MEK-2 em células tumorais com expressão de MAP2K2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.