Med30 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406399

Panoramica

MED30 codifica una subunità centrale del complesso Mediator, che collega fattori di trascrizione specifici per sequenza all’RNA polimerasi II, consentendo un’avvio della trascrizione regolato e un’espressione genica dipendente dal promotore. Med30 contribuisce all’integrità strutturale del Mediator e supporta programmi trascrizionali coordinati che governano la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la segnalazione responsiva allo stress. Poiché Mediator integra molteplici input di segnalazione, alterazioni di MED30 possono modificare le reti trascrizionali coinvolte nel controllo proliferativo e nell’omeostasi cellulare. Una funzione deregolata del Mediator è spesso associata a stati di espressione genica rilevanti per la malattia, rendendo MED30 un nodo utile per studiare i circuiti trascrizionali nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Med30 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MED30 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MED30 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MED30 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Med30.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MED30 per lo studio della segnalazione di Med30, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MED30 critici per la funzione di Med30
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MED30 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Med30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Med30 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MED30. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Med30 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Med30 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MED30 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MED30 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.