ME3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417146

概要

ヒトME3は、ミトコンドリアに局在するNADP依存性リンゴ酸酵素をコードしており、リンゴ酸をピルビン酸へ酸化的脱炭酸する反応を触媒すると同時にNADPHを産生します。ME3はトリカルボン酸（TCA）回路とミトコンドリアのレドックス制御を結び付けることで、生合成に必要な還元力、抗酸化防御、栄養条件の変化に応じた代謝の柔軟性を支えます。ME3活性は、アナプレロシス／カタプレロシス、活性酸素種（ROS）の緩衝、ミトコンドリア機能に関わる経路に影響するため、代謝リモデリングやレドックスストレスの研究において重要です。ME3の発現変化や依存性は、ミトコンドリアNADPHバランスと酸化的代謝が疾患関連表現型に寄与する状況で検討されており、がん代謝やミトコンドリア機能障害などが含まれます。

ME3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるME3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、ME3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、ME3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ME3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ME3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、ME3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ME3の機能に不可欠なME3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ME3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ME3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびME3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、ME3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ME3 HDRプラスミド（h）および ME3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはME3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のME3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。