MCR Plasmide Double Nickase (h): sc-400672-NIC

NR3C2 codifica il recettore dei mineralcorticoidi (MCR), un recettore nucleare attivato da ligando che si lega a mineralcorticoidi e glucocorticoidi per regolare programmi trascrizionali che controllano il trasporto epiteliale del sodio, l’omeostasi del potassio, il volume dei liquidi extracellulari e la regolazione della pressione arteriosa. Dopo il legame con l’ormone, l’MCR trasloca nel nucleo e modula l’espressione genica tramite elementi di risposta ormonale e interazioni con coregolatori, intersecandosi con la segnalazione MAPK e con reti trascrizionali infiammatorie. Nel rene, nel colon e nei tessuti cardiovascolari, NR3C2 influenza il trasporto ionico guidato da ENaC/SGK1 e le risposte cellulari allo stress, collegando l’attività del recettore all’equilibrio elettrolitico e al rimodellamento dei tessuti. La deregolazione o la mutazione di NR3C2 è associata a disturbi della segnalazione mineralcorticoide, inclusi fenotipi con perdita di sale e alterazioni della fisiologia cardiovascolare e renale, a sostegno della sua rilevanza negli studi meccanicistici delle vie endocrine e cardiorenali.

MCR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NR3C2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NR3C2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NR3C2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NR3C2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.