Plasmide CRISPR d'Activation (m) MCP-1: sc-422838-ACT

Le gène murin **Ccl2** code la protéine chimioattractante des monocytes-1 (MCP-1/CCL2), une chimiokine CC sécrétée qui coordonne la chimiotaxie et le recrutement tissulaire des monocytes, des macrophages et d’autres leucocytes exprimant CCR2. La signalisation de MCP-1 s’intègre aux réseaux de cytokines inflammatoires et régule le trafic leucocytaire, l’activation endothéliale et la polarisation des macrophages au sein de la réponse immunitaire innée. L’induction de **Ccl2** est couramment associée à des programmes transcriptionnels dépendants de NF-κB et des MAPK lors d’infections, d’inflammation stérile et de lésions tissulaires. Une activité dérégulée de l’axe MCP-1/CCR2 est fréquemment étudiée dans des contextes tels que les modèles de maladies inflammatoires, l’inflammation métabolique et l’infiltration de cellules myéloïdes associées aux tumeurs.

MCP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ccl2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MCP-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ccl2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ccl2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MCP-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ccl2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MCP-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MCP-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Ccl2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.