Plasmide CRISPR/Cas9 KO MCAT (h): sc-404338

Présentation

MCAT (malonyl-CoA:ACP transacylase) est une enzyme mitochondriale nécessaire à la synthèse mitochondriale des acides gras (mtFAS) en transférant des groupements malonyle sur la protéine porteuse d’acyle (ACP), permettant l’allongement des chaînes acyles utilisées dans la production d’acide lipoïque. Par son rôle dans la génération de lipoate, MCAT soutient la lipoylation de complexes déshydrogénases clés tels que la pyruvate déshydrogénase et l’α-cétoglutarate déshydrogénase, reliant la mtFAS au métabolisme central du carbone, à l’homéostasie rédox et au flux énergétique mitochondrial. Une perturbation de l’activité de MCAT peut influencer la respiration mitochondriale et l’utilisation des métabolites, avec des effets en aval sur le stress oxydant et la reprogrammation métabolique. Ces processus sont pertinents pour des études mécanistiques du dysfonctionnement mitochondrial et de la biologie des maladies associées au métabolisme, notamment dans des contextes où l’état de lipoylation et la fonction d’enzymes liées au cycle de l’AC/TCA sont altérés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MCAT (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MCAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MCAT, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MCAT à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MCAT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MCAT pour l'étude de la signalisation de MCAT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MCAT essentiels à la fonction de MCAT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MCAT pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MCAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MCAT plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MCAT. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MCAT plasmide HDR (h) et le MCAT (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MCAT pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MCAT définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.